医疗卫生

原理：通过结晶紫初染和碘液媒染后，在细胞壁内形成了不溶于水的结晶紫和碘液的复合物，革兰阳性菌因其细胞壁较厚，肽聚糖网层次较多且交联致密，故欲乙醇脱色处理时，因失水反而使网孔缩小，再加上它不含类脂，故乙醇处理不会出现缝隙，结晶紫与碘的复合物仍然存在于细胞壁内，使其仍呈紫色;在革兰阴性细菌中中，乙醇处理不但破坏了胞壁外膜，还可能损伤肽聚糖层和细胞质膜，于是被乙醇溶解的结晶紫和碘的复合物从细胞中渗漏出来，当再用衬托的染色液复染时，显现红色。

一、操作前准备

灭菌玻片、生理盐水、菌落、接种环、酒精灯、革兰染液、香柏油、显微镜

二、操作步骤

1.制片和固定：取生理盐水一滴，置玻片上，用接种环挑取菌落，将细菌放在生理盐水内研匀成薄的菌膜后，自然干燥，并经火焰固定。

2.初染：加草酸铵结晶紫1-2滴，使染液覆盖涂片约一分钟，用细水流冲洗。

3.媒染：滴加碘液冲去残水，并覆盖约一分钟，染色约1min，用细水流冲洗。

4.脱色：将载玻片上的水甩净，并衬以白背景，用95%酒精滴洗至流出酒精刚刚不出现紫色时为止，约20-30秒，立即用水冲净酒精。

5.复染：在涂片薄膜上滴加1-2滴沙皇，使染液覆盖涂片，1min后水洗。

6.镜检：干燥后，置油镜观察。革兰氏阴性菌呈红色，革兰氏阳性菌呈紫色。

三、注意事项

1.涂片不宜太厚，在涂片时细菌挑的太多，没法分开，在脱色时就不能将第一步染上的结晶紫的颜色脱去，可能会使革兰阴性菌也出现紫色，误认为革兰阳性菌。

2.脱色时间严格按照说明书上的时间进行。

3.一定要记得固定，固定方法为：将干燥后的细菌涂片以中等速度通过火焰三次，以玻片触及手背皮肤热而不烫为宜。